細胞基質金屬蛋白酶12活性熒光定量檢測試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

 細胞基質金屬蛋白酶12（MMP-12）活性熒光定量檢測試劑是一種旨在通過熒光探針5-羧基熒光素供體和QXL受體標記的多肽底物RPKPVENvaWRK，在蛋白酶的水解下，解離抑制基團，產生熒光產物，即采用熒光法來測定樣品中酶活性的*而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種細胞裂解萃取液樣品（動物、人體）、部分或*純化酶樣品中基質金屬蛋白酶12的定量檢測，以及抑制劑和激活劑的篩選。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，安全可靠。

技術背景

基質金屬蛋白酶（Matrix metalloproteinases；MMPs）是一類結構高度同源的分泌型或膜相關性鋅內肽酶的總稱，因含有金屬（鋅、鈣）離子而得名。其功能在于分解細胞外基質成分。迄今為止發現的MMPs至少有28種，幾乎能降解除多糖以外的全部細胞外基質（extracellular matrix）成分，同時參與胚胎發育、形態形成、胚泡植入（blastocyst）、血管形成、組織再吸收（tissue resorption）、疾病發生，例如關節炎、癌細胞浸入轉移等。根據降解的底物不同可將MMPs分為4大類：（1）膠原酶：MMP1、MMP8、MMP13主要消化Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ、Ⅹ型膠原和蛋白多糖；（2）明膠酶（Ⅳ型膠原酶）：MMP2、MMP9，又稱明膠酶A、B，主要消化Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ型膠原和彈性纖維；（3）基質溶解素：MMP3、MMP7、MMP16、MMP11、MMP12，主要作用于纖維粘連蛋白、層粘連蛋白、彈力纖維、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ膠原及MMP1、MMP8、MMP9；（4）膜型金屬蛋白酶：MT₁-MMP、MT₂-MMP、MT₃-MMP，主要作用于明膠、Ⅳ型膠原、MMP2。體內絕大多數細胞并不儲備MMPs，當需要MMPs的信號傳遞到細胞后才臨時合成，合成的MMPs以無活性的酶原（proenzyme）形式分泌到細胞外，隨后被多種蛋白酶和非蛋白酶水解以及熱處理激活，一種激活的MMPs可激活另一種MMPs，形成瀑布效應。基質金屬蛋白酶12（MMP12），又稱為巨噬細胞彈力蛋白酶（macrophage elastase），其目標蛋白是彈性蛋白（elastin）、纖維連接蛋白（fibronectin）、層粘蛋白（laminin）、纖維蛋白溶酶原（plasminogen）、尿激酶型纖溶酶原激活物受體（u-PAR）和組織因子通路抑制劑（tissue factor pathway inhibitor）。MMP12與吸煙型肺氣腫（smoke-induced emphysema）、腫瘤和其它疾病等發生有關。MMP12酶原型為54kD，而活化型為45kD和22kD。基質金屬蛋白酶12的活性檢測通過熒光共振能量轉移法（Fluorescence resonance energy transfer；FRET），即傳遞激發狀態的能量由處于較短波長的供體（donor）到覆蓋供體波長的受體（acceptor），使得距離依賴性反應的供體的散發光子淬滅（quench）?；诙嚯牡孜?/span>RPKPVENvaWRK兩端標記的供體熒光探針5-羧基熒光素（5-carboxyfluorescein；5-FAM）受到另一個受體基團QXL的抑制而熒光淬滅（quench）。一旦多肽受到MMP12水解，釋放出具有強烈熒光的5-羧基熒光素多肽片段，據此根據其熒光強度（激發波長490nm，散發波長520nm）的變化，來定量測定基質金屬蛋白酶12的活性。基質金屬蛋白酶12反應系統為：

MMP12

5-FAM-RPKPVE-Nva-WRK-QXL-NH2   →    5-FAM-RPKP  +  VE-Nva-WRK-QXL-NH2